肉的宰后嫩化具体归因于肌原人造食物弹性纤维设备构造类型的弄坏，肌原人造食物弹性纤维设备构造类型是由内源性球核核核淀粉酶酶质淀粉电离酶生物生物降解肌原人造食物弹性纤维和生殖細胞骨架球核核核淀粉酶酶质致使的。与数几年来经常是观注视角的钙球核核核淀粉酶酶质酶不一样的，胱天球核核核淀粉酶酶质酶（caspases）比较近成為感需求时题。胱天球核核核淀粉酶酶质酶在生殖細胞凋亡的执行程序价段起着关键的的专业能力，中仅caspase-3在去逝球核核核淀粉酶酶质淀粉电离中的专业能力是各角度和繁多的，为此什么值得进1步实验。S-亚硝基化能够调试钙降低、专业能力排泄、球核核核淀粉酶酶质质生物生物降解和生殖細胞凋亡来调试吃起来，具有嫩度和持水专业能力。前中期实验发掘S-亚硝基化都可以变动依赖于线粒体的caspase-3级联体现，这有可能是背部肌肉生殖細胞凋亡和牛肉片品性变换的原由。caspase-3的实验重点是是其与生殖細胞凋亡的内在联系，殊不知，都不有实验研究S-亚硝基化调试caspase-3的新机制。

2024年9月由扬州草业大学考研张万刚教学管理团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物制品为该研究提供了亚硝基化呈现组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

繁体中文标题文字：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

期刊杂志：Journal of Agricultural and Food Chemistry

2021年关系指数：5.7

提出时：2024年9月

朋友工作单位：南京农业大学

实验原材料：蛋白

拜谱保证的技术：亚硝基化修饰组学

技术设备的路线：

一、探析结杲

01.Caspase-3几丁质酶

当前尚不模糊NO对caspase-3的促使影响需不需要归因于NO介导的S-亚硝基化，不一样盐浓度梯度方向的GSNO是外源性NO生产，以成脂caspase-3的休外S-亚硝基化。效果说明，与不会有GSNO的组差距，100、200和400μM GSNO组的caspase-3吸附性更为明显下降（图1），与事先有关报道同样。GSNO治理 下降caspase-3吸附性的未知主观原因仍仍待阐释。

图1 区别含量的GSNO正确处理对caspase-3活力性的决定

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化能力

实验Caspase-3的亚硝基化地步，以阐释GSNO对Caspase-3的现象性。经GSNO办理后，加测到caspase-3核蛋白S-亚硝基化的强度增高（图2）。等没想到证明，外源性GSNO培育可获得成功诱骗caspase-3的身体之外S-亚硝基化。让人大吃一惊的是，在沒有GSNO产生的差表组中加测到个微亮的S-亚硝基化带，这证明caspase-3有机会进行内源性的S-亚硝基化。于此，本实验中caspase-3的S-亚硝基化地步较高，而caspase-3的活力性有效降低，这与前几天的实验相一致。其实，caspase-3的特男人S-亚硝基化突显位点尚不看清楚，还需用进一个步骤的不断探索。

图2 GSNO清理对caspase-3S-亚硝基化情况的影向

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化淡化组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的队列。紫色标示的队列说道S-亚硝基化肽，黄色标示的C说道S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱分析

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3化学降解结血清

结淀粉酶看做本身关键性性的肿瘤上皮细胞骨架淀粉酶，在保护肌肿瘤上皮细胞成分的成分完成性和内缩性管理方面起侧重于要性帮助，分析S-亚硝基化caspase-3对结淀粉酶吸附的明感性和理性具备关键性性现实意义。与Std（未用胱天淀粉酶酶-3和GSNO孵育的起始肌氯纶淀粉酶）组相信，0 μM GSNO组（肌原氯纶和caspase-3的孵育，无GSNO）的完成结淀粉酶成分相关性削减，系统提示caspase-3对结淀粉酶具备不确定性的淀粉酶淀粉水解能力素质。在GSNO孵育后，完成结淀粉酶的成分显著提升（P < 0.05）。不仅而且，当GSNO盐浓度偏高时，完成结淀粉酶的成分延续调涨（P < 0.05）（图5）。这种看到发现，SNO遮盖的caspase-3以总体水平依赖于的形式减缓结淀粉酶的吸附。

图5.S-亚硝基化caspase-3生物降解结球蛋白

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3降解塑料肌钙淀粉酶-T

肌钙球蛋清-T (TnT)是原肌球球蛋清缓解担任腹肌内缩的丝条的一定要肌原植物纤维板材料球蛋清。TnT的化学溶解特证是测试到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化经济条件下，caspase-3对TnT的化学溶解环境如下图图甲中6图甲中，与Std组（无caspase-3和GSNO的肌原植物纤维板材料）比起，caspase-3组中30 kDa TnT精彩段落可观性增多，证明caspase-3参与的了TnT的化学溶解，显然，caspase-3与GSNO的孵育引发30 kDa TnT的减小。在100和200 μM GSNO组相互无测试到显然的差异化(P > 0.05)，而当GSNO的氧浓度高达400 μM 时，该精彩段落可观性减轻(P < 0.05)。这种会发现证明了SNO体现的caspase-3对TnT化学溶解的限生产制功能。结球蛋清和TnT是caspase-3的比较敏感底物，而GSNO加工减小caspase-3的特异性将引发肌原植物纤维板材料球蛋清化学溶解情况减小。与此同时指出，NO诱发的S-亚硝基化会依据体现半胱氨酸残基来缓解caspase-3的特异性，从根本上继续一个脚印后果其对结球蛋清和TnT的球蛋清电离程度，才能后果鸡肉品控。

图6. S-亚硝基化caspase- 3可降解肌钙蛋清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人总结

本深入分析有何意义浅论S-亚硝基化对caspase-3淡化的直接关系简答接着随后对鸡肉肌原氯纶身体生物降解的直接关系。血清酶S-亚硝基化能够淡化caspase-3的半胱氨酸残基，可以引起caspase-3活力性变低，加大力度一个脚印治理和改善了其对鸡肉肌原氯纶血清酶的血清酶溶解力量。

三、拜谱总结

实验选择了酶活查重，亚硝基化装饰组学分折，WB等查重途径，出现淀粉酶S-亚硝基化能够 装饰caspase-3的半胱氨酸残基，这诱发了caspase-3渗透性的降低了，齐头并进一个步骤调节了其对牛肉片肌原钎维淀粉酶的淀粉酶油脂水解技能。本实验为诠释淀粉酶质亚硝基化对吃起来的政策调控系统作为了了个新的感觉。

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决定性医学文献：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663